Centrífuga de baixa velocidade

A centrífuga de baixa velocidadegira para criar força centrífuga que separa componentes de diferentes densidades em uma amostra. Durante a separação celular, células, fragmentos celulares e outras biomoléculas são separados em diferentes locais por força centrífuga, dependendo de sua massa e densidade. Especificamente, quando o tubo da amostra é girado em alta velocidade dentro do rotor de centrífuga, a força centrífuga nos diferentes componentes da mistura é proporcional à sua massa e também é afetada pela velocidade e pelo raio de rotação. As células ou partículas maiores são jogadas no fundo do tubo de centrífuga, enquanto os componentes menores permanecem na camada superior. Esse princípio de separação baseado em densidade e massa faz com que as centrifugas de baixa velocidade seja uma ferramenta ideal para a separação celular.

● Escolhendo a velocidade e o tempo certos centrífugos: A escolha da velocidade e do tempo é crucial para a eficácia da separação celular. Velocidade de rotação muito alta pode levar à ruptura ou dano das células, enquanto um tempo muito longo pode levar à agregação celular ou precipitação incompleta. Portanto, a seleção dos parâmetros centrífugos deve ser considerada de acordo com o tipo, tamanho e densidade das células.
● Garanta o saldo da amostra: O equilíbrio da amostra é a chave para impedir que a centrífuga gere vibração e ruído durante a operação. Ao colocar amostras, é necessário garantir que as amostras em todos os tubos de centrífuga sejam de massa igual ou semelhante. Se houver uma grande diferença na qualidade da amostra, uma quantidade apropriada de tampão ou solução salina normal pode ser adicionada ao tubo de centrífuga mais leve para alcançar o equilíbrio.
● Selecione o tubo de centrífuga direita: A qualidade e o aperto do tubo de centrífuga também têm um impacto importante na eficácia da separação celular. Os tubos centrífugos de alta qualidade têm boa resistência à vedação e corrosão, o que pode efetivamente impedir vazamentos e contaminação da amostra. Ao mesmo tempo, a especificação do tubo centrífugo também precisa ser selecionada de acordo com o volume da amostra e a força centrífuga necessária.
● Preste atenção à manutenção e manutenção da centrífuga: Limpe regularmente a câmara centrífuga e o rotor da centrífuga para evitar a contaminação residual da amostra. Limpe o tempo após o uso para evitar a corrosão causada por resíduos líquidos. Ao mesmo tempo, também é necessário verificar regularmente o cabo de alimentação e o plugue e outros componentes da centrífuga para garantir que eles estejam intactos e evitar riscos de segurança.

● Tratamento celular em engenharia genética: Na engenharia genética, as células geralmente precisam ser cultivadas, transfectadas, rastreadas e outros tratamentos. As centrífugas de baixa velocidade podem ser usadas para etapas como concentração e lavagem de suspensões celulares, bem como coleta de células após a transfecção. Por centrifugação, impurezas e células não transfectadas no meio de cultura celular podem ser removidas, e a eficiência e a pureza da transfecção de genes podem ser melhoradas.
● Purificação e isolamento de proteínas: Na pesquisa de proteínas, proteínas específicas precisam ser purificadas a partir de amostras biológicas complexas. As centrífugas de baixa velocidade podem ser usadas para esclarecimentos iniciais de soluções proteicas e remoção de impurezas, como detritos celulares, ácidos nucleicos, etc. Por tratamento centrífugo, uma solução de proteína relativamente pura pode ser obtida, o que fornece a base para as etapas de purificação subsequentes.
● Isolamento e purificação de partículas de vírus: As partículas de vírus geralmente têm uma densidade e tamanho específicos e podem ser separados e purificados por centrífugas de baixa velocidade. Por exemplo, na pesquisa de virologia, as partículas virais podem ser separadas das culturas celulares usando centrifugação diferencial. Este método aproveita as diferenças nas forças centrífugas em diferentes velocidades para separar partículas virais de outros componentes celulares.
● Controle de produção e qualidade de medicamentos biológicos: No processo de produção de medicamentos biológicos, as centrífugas de baixa velocidade são frequentemente usadas para o esclarecimento do fluido de cultura celular, a remoção de detritos celulares e a separação inicial de medicamentos. Além disso, no controle de qualidade dos medicamentos, as centrífugas de baixa velocidade também podem ser usadas para detectar indicadores-chave, como a distribuição de tamanho e a estabilidade das partículas de medicamentos.

◇ Separação primária: As centrífugas de baixa velocidade são frequentemente usadas para a separação primária de partículas de vírus. No processo de extração de vírus, grandes partículas, como fragmentos celulares e impurezas, podem ser removidas por centrifugação de baixa velocidade, e a suspensão de vírus relativamente pura pode ser obtida. Esta etapa facilita as etapas de purificação subsequentes.
◇ Enriquecimento de vírus: Em alguns casos, as centrífugas de baixa velocidade também podem ser usadas para o enriquecimento de vírus. Ao ajustar o tempo e a velocidade da centrífuga, as partículas de vírus podem ser depositadas na parte inferior do tubo de centrífuga, para que a amostra de vírus concentrada possa ser obtida extraindo o sobrenadante. No entanto, deve-se notar que o efeito de enriquecimento de centrífugas de baixa velocidade é relativamente limitado e, para ocasiões em que são necessários vírus de alta pureza, outros métodos de purificação geralmente são necessários.

 

● Método centrífugo diferencial: O método centrífugo diferencial é um método de separação de partículas de diferentes tamanhos e densidades usando velocidades diferentes e tempos centrífugos. A centrifugação diferencial é frequentemente usada para remover ainda mais as impurezas e concentrar o vírus durante a purificação do vírus. Depois de remover grandes partículas, como organelas por centrifugação de baixa velocidade, as partículas de vírus são precipitadas por centrifugação de alta velocidade.
● Método de centrifugação de gradiente de densidade: O método de centrifugação do gradiente de densidade é o uso de meios de densidades diferentes para formar um gradiente, de modo que partículas de diferentes densidades se estabelecem em diferentes posições no método do gradiente. Na purificação do vírus, a centrifugação do gradiente de densidade é frequentemente usada para separar partículas de vírus de outras impurezas de densidade semelhante (como proteínas, ácidos nucleicos, etc.). Ao preparar o gradiente de densidade no tubo de centrífuga com antecedência e depois adicionar a suspensão do vírus na superfície do gradiente para centrifugação, as partículas do vírus se estabelecerão em uma posição específica no gradiente para formar uma zona de sedimentação.
● Método de precipitação: O método de precipitação é precipitar as partículas do vírus adicionando reagentes químicos. Os agentes precipitantes comuns incluem sulfato de amônio, polietileno glicol (PEG), etc. O método de precipitação pode ser usado para uma purificação adicional do vírus. Ao ajustar a concentração e o valor de pH do precipitador, as partículas de vírus podem ser seletivamente precipitadas para remover as impurezas.
● Método de filtração: O método de filtração é um método de separação de partículas de vírus de outras impurezas pela coluna de cromatografia de filtração em gel. A coluna cromatográfica do filtro de gel é separada de acordo com o tamanho das partículas, e as moléculas grandes fluem para fora da coluna cromatográfica primeiro, e as pequenas moléculas fluem posteriormente. Ao selecionar condições de gel e cromatográfico adequados, as partículas de vírus podem ser efetivamente separadas de outras impurezas.
● Método eletroforético: O método eletroforético é o uso da ação do campo elétrico para fazer partículas carregadas no método de migração do campo elétrico. Na purificação do vírus, a eletroforese é frequentemente usada para separar partículas virais de outras impurezas carregadas. A separação e purificação eficiente de partículas de vírus podem ser alcançadas selecionando condições e meios adequados de eletroforese.

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